Los alumnos de primer curso de Anatomía de CESUR, han realizado la práctica de extracción de ADN. Nuestras compañeras Estefanía y Leticia quieren compartir con todos vosotros su experiencia, el fundamento de esta práctica y la importancia del estudio del ADN.
Estefanía (izda) y Leticia (dcha), autoras de este post.
EXTRACCIÓN DE ADN DE FRESA
Introducción:
El ADN es un ácido desoxirribonucleico, es un compuesto orgánico que contiene la información genética de un ser vivo, en virus, en las células procariotas y en el núcleo de las células eucariotas. Tiene como función principal almacenar información genética para la construcción de proteínas y ARN que es imprescindible para cualquier función vital de un organismo. A continuación, veremos el procedimiento que debemos seguir para extracción de ADN en una fresa y así poder apreciar el material genético de la fresa.
Fundamento:
La molécula de ADN es un polímero de cadenas de nucleótidos. Es decir es polinucleótido. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tenemos que romper la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solución con detergente y sal es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Cuando el ADN va a utilizarse en el laboratorio para otras aplicaciones, se toman estas fibras que precipitan en la interfase y se disuelven en agua o en un amortiguador apropiado.
Materiales:
- 10g de Fresas Agua destilada
- Detergente 10 ml Zumo de piña
- Alcohol 96º muy frío Tubos de ensayo y vasos de vidrio
- Colador Espátula
- Mortero 7g de sal gorda
- Bascula
Procedimiento:
Primero preparamos un tampón de lisis, para ello mezclamos en una duquesita:
- Media cucharada de detergente
- Una pizca de cloruro de sodio
- Un chorrito de zumo de piña
Completamos con agua hasta los 30ml.
El detergente y el NaCl se utilizan para romper las paredes celulares, las membranas plasmáticas y las membranas nucleares y así dejar libre las moléculas de ADN. Por otro lado, el zumo de piña aporta la enzima papaína, cuya función es degradar las proteínas.
Extracción:
Para ello debemos:
- Pesar 10 gr de fresa, cortada en trocitos pequeños
- Añadir 0.7 gr de sal gorda
- Añadirle 10 ml de la mezcla anterior
Seguidamente, con el mortero mezclamos la muestra hasta obtener una masa homogénea. Con este proceso nuestro objetivo es romper la pared celular y la membrana celular para poder acceder al núcleo de la célula.
- Filtrar con un embudo, ayudándonos de una gasa para eliminar los restos sobrantes de fresa que no hemos podido homogeneizar.
- Coger 2ml de la solución filtrada y añadir la misma cantidad de etanol añadiéndolo con ayuda de una pipeta con mucho cuidado para que no se mezcle.
- Observar la aparición del ADN en la interfase
Estefanía añadiendo con mucho cuidado el etanol para purificar el ADN
Tras añadir el alcohol, el ADN se visualiza en al interfase de las dos soluciones
Aportaciones:
Al estudiar las moléculas del ADN, podemos hallar o diagnosticar mutaciones existentes en los seres vivos , identificar familias, predecir susceptibilidades e incluso desarrollar técnicas de recombinación (extraer el ADN de un organismo e insertarlo en algún otro para obtener un producto en específico)
Prof. Susana Nieto Cerón
